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免疫组化常见脱片原因及解决

来源:http://www.weikekejiao.com/    日期:2018-11-29    浏览量:载入中...

免疫组化,其实方法和操作都不是很难,关键是结果出现异常时如容易出现组织脱片该如何去解决?我们先了解一下组织脱片的原因有哪些?
1.空白片少,经不起反复折腾;
2.回顾性研究中不可能使用新鲜的切片组织;
3.某些单位先前并没有使用防脱载玻片保留组织标本等。
针对这些问题,可以尝试如下改良方法。

针对这些问题,可以尝试如下改良方法。
如上所说,先采用酶修复,后热修复,一般热修复是直接置于相应的修复液中煮沸,期间还有可能使用高压锅。
1. 酶修复,各自抗原特性选择,有些时候酶修复的时间是极其难把握的。时间太长,消化过头容易脱片;时间太短,抗原暴露不充分,这些都影响实验结果。建议稀释浓度,延长修复时间。
2. 热修复,理论基础:抗原修复时仅需要组织与修复液接触,且只要薄薄的一层就能反应。
改良一:敞开高压锅盖,置一铁架于修复液面,其上放置玻片,玻片上滴加修复液体(铁架高度以沸腾修复液不会触及玻片为妥)。为了防止玻片上的修复液挥发,可在滴加修复液后盖上盖玻片,提供热源使修复液保持沸腾状态,使用热蒸汽加热。

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优点:避免了组织在液体中的剧烈沸腾,减少脱片。
缺点:降低了抗原修复的温度,可能导致某些抗原无法达到其修复所需温度,使用此法可能需要适当延长热修复时间。
改良二:修复液煮沸后,滴加于载玻片上,覆盖盖玻片,用实验室常见的封口膜将玻片和盖玻片包绕(包绕的目的不是为了隔绝空气,而是防止盖玻片移动导致修复液在组织表面挥发,封口膜受热后收缩,即可固定)。将包绕好的玻片置入铁架上,按原先操作继续(可放入高压锅中)。

优点:避免了改良一中可能无法达到所需修复温度的问题,可以放入高压锅中。
缺点:片子变成平铺展开,一次所能做的片子数目减少。

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需要注意的是,使用盖玻片后,尤其是使用封口膜后,揭片的过程一定要轻柔,用镊子,避免徒手操作,如遇到揭片困难,可适当用 PBS 冲洗,不可暴力揭片,否则适得其反;另外由于每个实验室条件不同,还应根据自己所在实验室条件调整。

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