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病理切片的制作

来源:http://www.weikekejiao.com/    日期:2019-04-24    浏览量:载入中...


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病理切片的制作
1.选材
(1)材料新鲜:选材组织愈新鲜愈好,人体组织一般在离体后,动物组织在处死后灵敏固定,以确保原有的形状学结构。
(2)组织块的大小:所取组织块较志向的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm,以使固定液能灵敏而均匀地进入组织内部,但根据制片材料和目的不同,组织块的较志向体积也不同,如制作病理外检、科研切片,其组织块可以薄取0.1~0.2cm即可,这样可以缩短固定脱水透明的时间,若制作教育切片厚取0.3 ~0.5cm,这样可以同一蜡块制作出较多的教育切片。
(3)勿揉捏组织块: 切取组织块用的刀剪要尖利,切开时不行来回锉动。夹取组织时切勿过紧,避免因揉捏而使组织、细胞变形。
(4)标准选材部位: 要准确地按解剖部位选材,病理标本选材按照各病变部位、性质的不同,根据要求标准化选材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构,决议其切面的走向。纵切或横切往往是闪现组织形状结构的要害,如长管状器官以横切为好。
(6)坚持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等,可用水冲刷洁净后再放入固定液中。
(7)坚持组织的原有形状:新鲜组织固定后,或多或少会发生缩短现象,有时甚至彻底变形。为此可将组织展平,以尽可能维持原形。
2.固定
(1)小块组织固定法:这是最常用的办法,从人体或动物体取下的小块组织,须当即置入液态固定剂中进行固定,一般,标本与固定液的份额为1:4~20,但组织块不宜过大过厚,不然固定液不能灵敏渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
(2)打针、灌注固定法:某些组织块由于体积过大或固定液极难进入内部,或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜选用打针固定或灌注固定法。将固定液注入血管,经血管分支抵达整个组织和全身,从而得到充分的固定。
(3)蒸汽固定法:比较小而厚的标本,可选用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片,则应在血片未枯燥前选用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。
  最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。
3.脱水透明
   标本经过固定和冲刷后,组织中含有较多的水分,必须将组织块内的水分置换出来,这一进程叫做脱水。无论是用白腊切片,仍是用火棉胶切片,都必须除去组织中所含水分,因含水组织与白腊、火棉胶等包埋材料不相容,常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。
   脱水的进程是:80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时,此进程可用脱水机自控完结。
   丙酮也是一种脱水才干很强的脱水剂,但因其脱水才干很强,对组织有剧烈缩短效果,在制作科研、教育切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于白腊,还要经过一个能溶于白腊的溶剂代替进程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水杨酸甲酯等。
4.浸蜡、包埋
(1)使白腊浸入组织中,替代组织中含有的透明剂。
(2)包埋:将浸蜡后的组织置于消融的固体白腊中,白腊凝结后,组织即被包在其间,称蜡块,此进程称为包埋。
5.切片和贴片
(1)修整蜡块:可视其组织的大小,在组织边际约0.1~0.2cm处,切去余蜡部分,不然易构成组织皱缩不平。
(2)准备好切片用具:切片刀、毛笔、眼科镊子(弯)、漂烘温控仪
(3)装置蜡块:将修好的蜡块装置在金属或木制持蜡器上。
(4)装置切片刀:将切片刀装置在切片机的刀台上,把刀台上的紧固螺丝旋紧,使切片时不发生振动,能坚持必定的切片厚度。
(5)切片的厚度:切片机的厚度调节器上刻有0~50μm或0~25μm,可任意选择其厚度,白腊切片的厚度一般在4~6μm。
(6)切片
(7)铺片:用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40~45℃的水面上,借水的张力和水的温度,将略皱的蜡带天然展平。
(8)贴片、烘片:待切片在恒温水面上充分展平后,将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水,置入60~65℃恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15~30分钟,脱去溶化组织空隙的白腊。
6.染色和封片
   常用的染色办法是苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin)染色法,简称H.E染色法。这种办法对任何固定液固定的组织和运用各种包埋法的切片均可运用。苏木素是一种碱性染料,可使组织中的嗜碱性物质染成蓝色,如细胞核中的染色质等;伊红是一种酸性染料,可使组织中的嗜酸性物质染成赤色,如大都细胞的胞质、核仁等在H.E染色的切片中均呈赤色。
H.E染色程序如下:脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固
  惯例苏木素染色中的对比染色是用伊红,近年来在英、美国家的一些实验室则选用焰红(phloxine),此外也有用桔黄G(OrangeG)、比布里希猩红(Biebrich scarlet)、波尔多红(Bordeaux red)等作为对比染色。伊红为染胞质、胶原纤维、肌纤维、嗜酸性颗粒等常用的染料。

病理切片

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